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　　病原學(xué)檢查（補充件）
　　A1 血液檢查
　　A1.1 厚血膜法
　　A1.1.1 血片制作：于晚9時至翌晨2時，以酒精棉球消毒耳垂（或指端）待干，用三棱針快速深刺，輕擠出血液，取血3大滴，約等于60μL，置于已編號的清潔載玻片上，涂成邊緣整齊、厚薄均勻的橢圓形或長方形厚血膜（約長3cm、寬1.5cm），平放于有蓋的玻片盒內(nèi)，以防落灰或蟲吃。
　　A1.1.2 血片染色：次日，將經(jīng)自然干燥的血片放入清水中溶血5～10min，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大規(guī)模普查可用硼砂美藍染色，鑒定蟲種及保存宜用吉氏液或蘇木素染色。
　　A1.1.2.1 硼砂美藍染色法：取美藍2g，硼砂3g，置研缽內(nèi)，邊研邊加水，待溶解后沖洗入瓶中，加蒸餾水100mL配成原液，過濾后放置備用。染色時取原液5mL加清水配成5％稀釋液，染3～5min，使血膜呈天藍色，然后用清水輕輕沖洗。本法染色前可不必先溶血、固定。
　　A1.1.2.2 吉氏染色法：染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研缽內(nèi)，加少量甘油充分研磨，邊研邊加，至甘油加完為止，然后傾入100mL玻塞瓶內(nèi)，用甲醇小量多次洗滌甘油染液傾入瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，充分搖勻，置于55～60℃溫箱內(nèi)24h或室溫下3～5天，即為原液，放置愈久染色效果愈佳，臨用時稀釋。將溶血后已干的血片用甲醇固定約1min，然后滴加10％染液（原液加清水稀釋配成）染45min，用蒸餾水輕輕沖洗。
　　A1.1.2.3 德氏蘇木素染色法；染液由A液即銨明礬飽和液（銨明釩20g、蒸餾水100mL）；B液（蘇木素結(jié)晶1g加純酒精10mL）；C液（甘油25mL加甲醇25mL）配成。將B液逐滴加入A液中，倒入一不蓋緊的容器內(nèi)，置于空氣流通處，經(jīng)2周至1個月使其充分氧化，過濾后加入C液，密封備用。血片溶血固定步驟同前。用上述染液染10～20min，用0.05％～0.1％稀鹽酸脫色片刻，流水沖洗至血膜呈藍色。
　　A1.1.3 血片鏡檢：將染色的血片在低倍顯微鏡下順序逐個視野檢查微絲蚴并計數(shù)，根據(jù)微絲蚴的大小、體態(tài)、折光性、有無鞘膜、表皮是否光滑及內(nèi)部結(jié)構(gòu)等特征，予以識別。在高倍鏡下觀察微絲蚴的體核及頭端空隙、神經(jīng)環(huán)、排泄細胞、排泄孔、肛孔、尾核等結(jié)構(gòu)。必要時需要用油鏡作進一步鑒別。
　　A1.2 微絲蚴濃集法
　　A1.2.1 改良蒸餾水法：取靜脈血1mL（取血時間同A1.1），置于盛有0.4mL3.8％枸椽酸鈉的離心管內(nèi)，混勻后加蒸餾水8～10mL，反復(fù)搖勻，待紅細胞溶解后經(jīng)每分鐘3000轉(zhuǎn)離心3～5min，傾去上液，加0.05mol/L氫氧化鈉8～10mL，按住管口，用力振蕩數(shù)次，放置5～10min，使纖維蛋白凝塊迅速溶解，再離心，吸除上清液，將沉渣涂片，待干、染色、鏡檢。
　　A1.2.2 微孔膜過濾法：將已編號的直徑25mm、孔徑5μm的微孔薄膜經(jīng)蒸餾水漂洗后裝入過濾器內(nèi)，濾膜下墊一張同樣大小經(jīng)生理鹽水潤濕的濾紙。用注射器取靜脈血1mL（取血時間同A1.1），加5％構(gòu)椽酸鈉0.1mL抗凝，吸入10％聚氧乙烯脂肪醇硫酸鈉［或可用2％吐溫80、0.1％碳酸氫鈉或10％聚氧乙烯脂肪醉硫酸鈉（ES）］溶液9mL，混勻后，去針頭，直接插入過濾器，緩慢推動注射器，使已溶血的血液通過濾膜，以10mL生理鹽水洗滌濾膜3次。開啟過濾器，取出薄膜，自然晾干后，置熱蘇木素中染色5min，水洗，待干，鏡檢。
　　A2 淋巴液、鞘膜積液、乳糜尿內(nèi)微絲蚴的檢查
　　A2.1 淋巴液、鞘膜積液（或其他抽出液）：直接涂片或用生理鹽水稀釋10倍離心后檢查沉渣。液體蛋白含量高而呈膠狀易凝者，加抗凝劑后檢查。
　　A2.2 乳糜尿（或乳糜積液）：取乳糜尿4mL于試管中，加乙醚2mL，混合振搖，使乳糜中脂肪充分溶解，棄去上層脂肪，加水稀釋10倍后離心檢查。
　　A3 活體組織檢查
　　A3.1 檢查淋巴管、淋巴結(jié)內(nèi)成蟲：將手術(shù)取出的結(jié)節(jié)，用大頭針固定于木板或軟木板上，分離結(jié)節(jié)周圍組織，仔細將病變的淋巴管壁切開，分離內(nèi)容物，取出干酪樣膿樣物檢查。如于結(jié)節(jié)出現(xiàn)2周以后切除、解剖，則管內(nèi)膿樣物可能已纖維化。膿樣物內(nèi)含大量巨噬細胞、單核細胞、嗜酸粒細胞及夏雷晶體。將干酪樣物或纖維組織移至玻片上，加數(shù)滴生理鹽水，然后用解剖針將外層組織分離，即可見被包圍的成蟲。時間較久者發(fā)生粘連，蟲體成碎段，不易將蟲體與組織分離，則可用一針將包圍的組織固定，另一針將蟲體沿其長軸向一端輕移，或?qū)⒔M織移至盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，使蟲體半浮，較易分離。但如結(jié)節(jié)形成較久，則不易取得完整的成蟲。成蟲或蟲段可保存于甘油酒精（70％酒精95mL，甘油5mL）中供鑒定。
　　A3.2 病理組織學(xué)檢查：切下可疑的淋巴結(jié)、淋巴管結(jié)節(jié)或其他組織，用10％中性甲醛固定1～2天，移至70％酒精中作病理切片。在切片中除可發(fā)現(xiàn)絲蟲成蟲外，尚可見到嗜酸粒細胞、網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞、淋巴細胞、漿細胞、纖維母細胞、異物巨細胞、肉芽腫、假結(jié)核、纖維組織增生、淋巴管周圍炎、管腔內(nèi)肉芽組織增生形成栓塞或息肉狀阻塞管腔等病理變化。在切片中所見結(jié)構(gòu)清楚的雌蟲體內(nèi)的微絲蚴體核清晰，所在淋巴管壁有少量漿細胞、淋巴細胞和嗜酸粒細胞浸潤，而無纖維素沉積或肉芽腫形成者，則成蟲可能為活蟲。如蟲體周圍有較多的嗜酸粒細胞和散在的組織，蟲體被炎細胞包繞形成肉芽腫，纖維化后形成纖維化結(jié)節(jié)，或結(jié)節(jié)內(nèi)蟲體已鈣化，則均為死蟲。如出現(xiàn)中性粒細胞浸潤、滲出，內(nèi)膜內(nèi)皮細胞腫大、增生，則為繼發(fā)性細菌感染。整理

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