病原學(xué)診斷方法
A1 病毒分離
從病人呼吸道采集標(biāo)本分離病原體。
A1.1 標(biāo)本收集
風(fēng)疹病人宜在出疹前4~5天至疹后1~2天取咽拭子標(biāo)本。先天性風(fēng)疹綜合征患兒除咽拭子標(biāo)本外,亦可于出生后盡快取尿液、眼淚、腦脊液、骨髓等標(biāo)本。將滅菌棉棒稍蘸液體(2%牛血清Eagle液),反復(fù)涂抹患者咽部數(shù)次,然后將棉棒浸于上述標(biāo)本液(1~1.5mL)中反復(fù)擠壓,標(biāo)本液中加足量抗生素(青、鏈霉素1000u/mL)及制霉菌素50μg/mL(或二性霉素5μg/mL)。
A1.2 接種
取0.1~0.2mL標(biāo)本液接種于生長(zhǎng)在試管中的單層原代乳兔腎細(xì)胞(PRK)(或其他原代細(xì)胞如原代人胚腎、兔胚纖維細(xì)胞、人胚二倍體細(xì)胞等)上,置37℃吸附1~2h后棄液,再加入含雙倍常規(guī)抗生素量的維持液1mL,置33℃培養(yǎng),每隔4天換液,連續(xù)觀察8~14天。如無(wú)細(xì)胞病變可見(jiàn),即置-30℃凍化3次,盲目傳代。每次傳代可接種于RK13、Vero、BHK21、LLC-MK2細(xì)胞上,連續(xù)盲傳3代。
A1.3 觀察細(xì)胞病變
一般于10天左右出現(xiàn)細(xì)胞病變。若不出現(xiàn)病變,可在接種14天后用100TCID50的ECHO11病毒或一定量的Sindbis、或VSV、或脊髓灰質(zhì)炎病毒攻擊,并設(shè)正常細(xì)胞種毒對(duì)照。若對(duì)照出現(xiàn)病變,接種標(biāo)本管無(wú)病變,表示原接種的細(xì)胞內(nèi)已有病毒感染的存在。
A 1.4毒株鑒定
用已知風(fēng)疹病毒免疫血清,觀察能否與新毒株起作用,傳統(tǒng)用中和試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)或采用免疫熒光法作病毒鑒定等。
A2 病毒核酸檢測(cè)
利用分子雜交技術(shù)或PCR技術(shù)檢測(cè)風(fēng)疹病毒核酸。整理
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