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專業實踐能力(A1/A2型題4)
一、A1/A2型題：每一道考試題下面有A、B、C、D、E五個備選答案。請從中選擇一個最佳答案。
1．ELISA間接法是檢測抗體最常用的方法，利用酶標記的是
A．抗原
B．抗體
C．抗抗體
D．抗抗原
E．化合物

正確答案:C　解題思路：間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。
 
2．重組免疫印跡試驗(recombinantstripimmunoblotassay，RIBA)與免疫印跡試驗或蛋白印跡試驗(westernblotas-say，WB)的不同在于
A．檢測抗原
B．不用硝酸纖維素膜
C．直接應用病毒裂解的蛋白
D．不是直接應用病毒裂解的蛋白
E．使用病毒裂解后的病毒蛋白

正確答案:D　解題思路：重組免疫印跡試驗(recombinantstripimmunoblotassay，RIBA)的原理不是直接應用病毒裂解的蛋白，而是應用重組蛋白或合成肽以條帶形式吸附在硝酸纖維素膜條上（類似于蛋白印跡試驗），當條上加入被測血清標本溫育后，如果標本中含有特異性抗體時，則和相應抗原帶結合形成抗原抗體復合物。
 
3．下列哪項不是HLA抗體檢測方法
A．補體依賴細胞毒實驗(CDC)
B．酶聯免疫法(ELISA)
C．流式細胞儀法(flowcytometry)
D．單抗原磁珠法(luminexTMflowcytometry)
E．酶聯免疫斑點檢測(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)

正確答案:E　解題思路：補體依賴細胞毒實驗又稱微量淋巴細胞毒實驗，是由美國洛杉磯加州大學的Pau1．Terasaki教授于1964年創建，主要原理是淋巴細胞具有HLA抗原，HLA抗體能結合到帶有相應抗原的淋巴細胞膜上，補體可以結合并在淋巴細胞膜上使其死亡。如果淋巴細胞不帶有相應的抗原，則無此作用。通過染色來觀察細胞是否死亡來確定相應的抗原或抗體，酶聯免疫法的基本原理是將HLA抗原包被在一個孔內，將患者血清加入孔中與孔內的HLA抗原反應，通過酶作用使其顯色，用熒光儀根據吸收光的不同來判斷結果，流式細胞儀法及單抗原磁珠法的基本原理都是將HLA單價抗原包被在不同顏色的微磁珠表面，用被檢測血清與磁珠反應，血清中HLA特異性抗體便與包被在磁珠上的抗原結合，然后再與標記PE的二抗孵育。根據熒光強弱通過流式細胞儀檢測出與這些磁珠對應的HLA抗體，單抗原磁珠法在普通流式細胞儀基礎上進一步改進，并通過分析軟件的更新，對于較弱的反應抗體也能準確檢出。ELISPOT結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術（即ELISA技術），能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。其技術原理就是用抗體捕獲培養中的細胞分泌的細胞因子，并以酶聯斑點顯色的方式將其表現出來。
 
4．導致交叉配血假陰性的原因不包括
A．試管污染洗滌劑
B．溶血現象
C．試驗溫度過高
D．血清中有高濃度血型物質
E．血清中可能存在的不規則抗體

正確答案:E　解題思路：血清中存在的不規則抗體可以使紅細胞凝集而出現交叉配血不合的陽性結果。如A2和A2B型患者血清內有抗A1抗體，能凝集A1紅細胞。此外還有抗Ⅰ抗體等。
 
5．下列哪項屬于血小板血型抗原的基因分型檢測技術
A．PIFT
B．MAIPA
C．放射免疫沉淀
D．PCR-SSP
E．ELISA

正確答案:D　解題思路：血小板免疫熒光試驗(plateletantibodiesdetectionbyimmunofluorescencetest，PIFT)是Von-denBorne等于1978年發明的。該法用待測血清孵育已知血小板，洗滌，再與熒光物標記的抗球蛋白反應后洗滌，在熒光顯微鏡下觀察結果。該法是較為可靠的血小板定型方法，1986年被國際血小板血清學研討會確定為標準的參考方法。單克隆抗體免疫固定血小板抗原方法(mono-clonalantibody-specificimmobizationofplateletantigen,MAIPA)是1987年Kiefel等確立的，是目前使用最為廣泛的方法。該法先制備羊抗鼠IgG包被的多孔板，另外，將鼠抗人血小板糖蛋白單克隆抗體和帶有抗體的血小板共同孵育，再將孵育后的復合物加入多孔板，孵育，洗滌，最后加入酶聯羊抗人抗體和酶反應底物后顯色，定量測定血小板抗體。此方法敏感度高、特異性強，即使是血小板上抗原數量很少的HPA-5抗原，也能檢測出。MAIPA方法也可靈敏地檢測血小板特異性抗體。放射免疫沉淀是使用放射性同位素標記的血小板膜蛋白，與受檢血清結合．電泳分離后采用自身顯影原理檢測是否存在血小板抗體。單克隆抗體酶聯免疫吸附試驗用多聚甲醛固定抗血小板糖蛋白單克隆抗體后，加入待測血清，最后加辣根過氧化酶標記的羊抗人IgG，用底物鄰苯二胺(O-phenylenediamine，OPD)顯色。上述方法均屬于血清學方法。而PCR-SSP(se-quencespecificprimer)即序列特異引物引導的PCR反應。其基本原理是設計特異性引物，利用引物3'端的特異性，直接擴增相應的HPA片段，PCR產物凝膠電泳檢測DNA條帶的存在或缺失，從而確定基因型。