重組柞蠶溶菌酶基因對口腔變形鏈球菌的作用
發布時間：2011-10-18 共1頁
溶菌酶是廣泛存在于動、植物及有機物體內的可作為殺菌劑的蛋白酶，它能夠催化水解肽聚糖上的N―乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的糖苷鍵，導致細菌細胞壁的裂解。尤其對革蘭氏陽性細菌作用明顯。我們已確定了柞蠶溶菌酶的cDNA和氨基酸序列。本項研究的目的是分析重組的柞蠶溶菌酶基因對口腔變形鏈球菌的作用。
畢赤酵母表達系統用于柞蠶溶菌酶的表達及純化。瓊脂擴散法用于檢測重組柞蠶溶菌酶對口腔變形鏈球菌的抗菌活性。
在畢赤酵母表達系統中表達的柞蠶溶菌酶能夠分泌到胞外，并且被糖基化。抑菌圈結果顯示重組柞蠶溶菌酶對變形鏈球菌有抑菌活性。
1.本研究建立了柞蠶溶菌酶的畢赤酵母表達系統。首次使用了柞蠶溶菌酶自身的信號肽序列，在畢赤酵母細胞中實現了柞蠶溶菌酶的分泌表達。蛋白質N端序列分析結果證實所表達的重組柞蠶溶菌酶N端氨基酸序列與預測的成熟柞蠶溶菌酶一致，表明柞蠶溶菌酶自身信號肽能夠準確有效地將成熟柞蠶溶菌酶分泌到酵母細胞外。
2.柞蠶溶菌酶在酵母菌中的表達是在0.5%甲醇誘導下，96小時達到高峰;純化的重組柞蠶溶菌酶分子量約為20，000道爾頓;EndoH酶解純化的重組柞蠶溶菌酶證實，柞蠶溶菌酶在酵母細胞翻譯過程中有N―糖基化修飾發生。
3.本研究采用瓊脂擴散法初步分析了重組柞蠶溶菌酶對變形鏈球菌的作用，重組的柞蠶溶菌酶對變形鏈球菌具有抑制其生長的作用。
