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　　本病不能單憑病史和臨床表現作出診斷。胸部X線檢查、電子計算機體層照相術有診斷價值。血清學試驗陽性對診斷有幫助。對菌絲型抗原測定為1∶4和對酵母型抗原為1∶16，是疾病活動的有力證據。組織胞漿菌素皮內試驗陽性表示過去或現在有感染，適用于普查。瓊脂凝膠雙相擴散試驗比補體結合試驗更具有特異性，但與芽生菌和球孢子菌病有交叉反應，因此必須同時作組織胞漿菌素、芽生菌素及球孢子菌素皮膚試驗，以便鑒別。

　　痰、尿、血、骨髓、胸水及其他分泌物涂片或培養分離出莢膜組織胞漿菌，或病理組織切片發現酵母型真菌，可以確診。纖支鏡活檢和灌洗物培養有確診價值，更適用于未鈣化結節病灶和空洞型病變。淺表淋巴結活檢，肝、脾、肺等穿刺活檢對確診很重要，但內臟穿刺宜慎重。