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　　確診有賴于分離到致病菌。在疾病早期取血、骨髓、腦脊液、受損皮膚粘膜及新生兒臍帶殘端、羊水、喉及外耳道分泌物、糞、尿等作細菌培養，均可分離到致病菌。由于利斯特氏菌與葡萄球菌、鏈球菌（包括肺炎鏈球菌）等有相同的抗原，可引起交叉反應，故血清學反應對診斷幫助不大。