發布時間:2012-05-07 共1頁
目前臨床檢測淋球菌的基因診斷方法主要采用PCR方法,但是該方法在臨床檢測中應注意幾個問題。
(1)引物設計除了以上所列的淋球菌PCR引物外,還可從在其它基因上設計,但是引物序列應具有特異性。因為細菌的染色體較大,許多基因序列并沒有搞清楚;同時細菌之間或近或遠有一定的同源性,而且細菌所含質粒序列間也存在同源性,因此設計引物一定要進行基因數據庫比較分析,同時進行特異性和靈敏性實驗,從中選擇引物進行臨床檢測。
(2)臨床標本處理對臨床標本來講,PCR模板要求越純越好。這就要求在采集標本時要取到準確的位置,對于無癥狀患者要適當多采樣,以保證采集到病原體細菌。另外由于臨床標本成分比較復雜,有時簡單處理的標本PCR擴增效果并不理想,這可能是由于雜質過多造成的,需要進一步純化,如用酚一氯仿抽提法純化,結果將會好轉。這種純化方法比較麻煩,目前已有商品化的DNA純化試劑盒,可以較簡便地從臨床標本中提取高純度的DNA.
(3)PCR產物的檢測方法不久以前臨床PCR檢測淋球菌幾乎都采用電泳的方法進行PCR產物的鑒定。該方法存在許多問題,如由于肉眼觀察的主觀性而造成假陽性和假陰性的結果。目前用雜交顯色法代替電泳法,提高了結果判斷的特異性和靈敏性。
總之,PCR方法與LCP方法比傳統的培養法在靈敏性和特異性上有了很大的提高,時間也大大縮短。隨著基因診斷技術的不斷改進。PCR方法與LCP方法在淋球菌的檢測將會成為常規的檢測方法。