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淋球菌連接酶鏈反應(LCP)檢測方法

發布時間:2012-05-07 共1頁

  目前PCR檢測淋球菌的方法被廣泛地使用。其特異性,靈敏性不斷提高。同時另一種基因診斷技術——連接酶鏈反應(LCP)也以其高特異,高靈敏性被應用于淋球菌的檢測中。LCP與PCR不同之處在于LCP用四對引物,所用酶是連接酶。連接酶可以將兩條相鄰引物連接起來。連接起來的兩條引物可以作為另兩條引物的模板,后者在連接酶作用下連接,又可作為模板,如此進行30~40次循環。LCP所用的模板處理方法與PCR模板制備相等。LCP所用的探針除了可以設計在CPPB基因上,也可以設計在染色體基因序列上,例如opa-1基因。美國Abbott實驗室在opa-1基因的48bp長的區域內設計了4個LCP探針,由于opa-1基因在淋球菌的染色體中有11次重復。因此,該組LCP探針具有高靈敏性和特異性。LCP反應過程:

  將模板加入LCP反應液中,100μl反應產物加入酶標板微孔中,進行顯色反應,最后用酶標儀讀取光值。根據Buimer的實驗證明,LCP在檢測男性尿道棉拭子標本的靈敏度為100%,尿液標本為88.9%,女性宮頸棉拭子標本為95.4%.LCP方法的特異性高達100%,這一點明顯高于PCR的特異性,避免了假陽性的發生。

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