淋球菌的基因探針診斷
發布時間：2012-05-07 共1頁
淋球菌的基因探針診斷，所用的探針有：質粒DNA探針，染色體基因探針和rRNA基因探針。
（1）質粒DNA探針
①隱蔽質粒DNA探針，淋球菌質粒分為三種：接合性質粒，分子最大，為36kbDNA；耐藥性質粒包括兩個質粒，DNA長分別為5.6kb和7.1kb；隱蔽質粒4.2kb.其中隱蔽質粒存在于96%的臨床淋球菌分離株中，其它奈瑟菌不含有此質粒，故可用它的序列作為特異DNA探針檢測淋球菌。Torres采用核酸雜交技術檢測淋球菌，所用探針為隱蔽質粒。用該探針對134株淋球菌和131株相關菌株的檢測，有124株淋球菌雜交反應陽性，占93%，還可與個別其它的奈瑟菌出現交叉反應，對測定探針的敏感性實驗表明可檢出102CFU淋球菌。研究證明隱蔽質粒中CPPB基因序列在所有的淋球菌染色體中（包括不含該質粒的菌株）。因此CPPB基因探針具有良好的特異性和敏感性。Torres等用CPPB基因探針檢測了201份臨床標本，采用非放射性地高辛標記系統，其敏感性和特異性分別為95%和98%.
②耐藥性質粒DNA探針
淋球菌的抗藥質粒可分為：①產青毒素酶淋球菌（PPNG）其β-內酰胺酶陽性；②具有高水平的質粒介導的耐四環素淋球菌（TRNG）。
PPNG菌株是1976年首次在實驗室分離得到的，該菌中含有編碼產青毒酶的基因，該基因既可整合于染色體上也可出現在質粒DNA中，而后者居多，稱之為產青毒素酶質粒，質粒有二種，大小分別為7.4kb和5.3kb.Pescador1998年設計一特異的檢測淋球菌編碼β-內酰胺酶基因的探針，采用酶化學發光法標記，液相雜交，用測光計測是特異雜交體的光量。在4h內可檢測104～105CFU的PPNG菌株。TRNG菌株雖對四環素耐藥，但通常對β-內酰胺酶類及喹諾酮類抗菌素敏感。因此，在實驗室藥敏檢測中可歸為敏感細菌。Pescador用抗四環素淋球菌（TRNG）tetm基因的寡核苷酸探針，該基因介導抗四環素，用酶化學發光標記，液相雜交，4h內可直接從臨床標本中檢出含有tetm基因的1.5×104CFu的淋球菌。
（2）染色體探針
染色體探針包括已知功能的基因探針，如菌毛DNA探針和paI基因探針，這些基因在淋球菌感染人細胞的過程中起著重要作用；未知功能的基因探針，這些探針序列與染色體的特定序列互補，但目前還不知這些基因序列的功能。以上兩種染色體探針由于在淋球菌中互補序列的拷貝數較低，檢測靈敏度較低，因此一般用的不多，除非有特殊的研究目的。
（3）rRNA基因探針
rRNA基因探針是將與rRNA互補的DNA作為探針，該探針的靶序列是rRNA序列。rRNA的基因探針的特點是：①可以增加探針檢測的靈敏度，rRNA基因探針可同時檢測rRNA分子和DNA分子；②rRNA具有進化上的保守性；③雜交方法簡便、快速；④由于rRNA的含量較高，標本不需增菌。美國Gen-Probe公司生產的淋球菌檢測探針PACEC，是以rRNA及其基因為檢測靶序列，采用放射性標記，在2h內可以完成檢測，Peter用這種探針檢測395個臨床標本，結果靈敏度和特異性分別為92.9%，99.4%，他認為PACEC系統篩查臨床標本中淋球菌是一個可靠的方法。該探針還可以檢測無癥狀淋球菌感染者，這是目前培養難于達到的。
