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　　蛋白質(zhì)分子不經(jīng)任何處理，直接用酶水解，檢出其中二硫鍵的肽段，然后將二硫鍵拆開，分別測定兩個肽的順序，將此兩肽結(jié)構(gòu)與測出的一級結(jié)構(gòu)比較，就能找出相應(yīng)的二硫鍵的位置。

　　含二硫鍵肽的檢出方法。

　　1)凝膠過濾或離子交換層析：用以分離各肽段，然后用特殊的二硫鍵顯色反應(yīng)找出含二硫鍵的肽。

　　圖1-21 對角線電泳技術(shù)圖解

　　2)對角線電泳或?qū)游觯?/STRONG>1966年Brown及Hartlay提出用對角線電泳進(jìn)行含－S-S-肽的定位，此方法是將水解后的肽混合物進(jìn)行第一相電泳，樣品點在中間，電泳畢，將樣品紙條剪下，置于裝有過甲酸的器皿中，用過甲酸蒸氣處理2小時，使-S-S-斷裂，此時含-S-S-肽段的靜電荷發(fā)生了改變。然后將紙條縫于另一張紙上，進(jìn)行第二相電泳電泳，電泳條件與第一相相同，只是與第一次方向成直角。在第二相電泳中，那些不含-S-S-的髣民泳情況與第一相相同，因此電泳后各肽斑均坐落在紙的對角線上，而那些含-S-S-的肽由于被氧化，電荷發(fā)生變化，第二相電泳速度就與第一相不同，電泳結(jié)果這些肽斑就偏離對角線，肽斑可用茚三酮顯示。對角線法由于其速度快，操作簡便以及能用于小分子樣品，是直接分離-S-S-肽的好方法。