2013年公衛助理醫師考試輔導：二硫鍵定位
發布時間：2012-10-29 共1頁
蛋白質分子不經任何處理，直接用酶水解，檢出其中二硫鍵的肽段，然后將二硫鍵拆開，分別測定兩個肽的順序，將此兩肽結構與測出的一級結構比較，就能找出相應的二硫鍵的位置。
含二硫鍵肽的檢出方法。
1)凝膠過濾或離子交換層析：用以分離各肽段，然后用特殊的二硫鍵顯色反應找出含二硫鍵的肽。
圖1-21 對角線電泳技術圖解
2)對角線電泳或層析：1966年Brown及Hartlay提出用對角線電泳進行含－S-S-肽的定位，此方法是將水解后的肽混合物進行第一相電泳，樣品點在中間，電泳畢，將樣品紙條剪下，置于裝有過甲酸的器皿中，用過甲酸蒸氣處理2小時，使-S-S-斷裂，此時含-S-S-肽段的靜電荷發生了改變。然后將紙條縫于另一張紙上，進行第二相電泳電泳，電泳條件與第一相相同，只是與第一次方向成直角。在第二相電泳中，那些不含-S-S-的髣民泳情況與第一相相同，因此電泳后各肽斑均坐落在紙的對角線上，而那些含-S-S-的肽由于被氧化，電荷發生變化，第二相電泳速度就與第一相不同，電泳結果這些肽斑就偏離對角線，肽斑可用茚三酮顯示。對角線法由于其速度快，操作簡便以及能用于小分子樣品，是直接分離-S-S-肽的好方法。
含-S-S-肽被分離后，即可進行肽段順序分析，并與已測定的該蛋白質的一級結構進行比較，即可找出相應的-S-S-位置，至此蛋白質的一級結構基本闡明。
今后蛋白質一級結構的測定正朝自動化、快速化及微量化發展，關鍵問題仍然是進一步尋找蛋白裂解和肽分離的方法。
蛋白質一級結構的測定不斷有新方法和新思路出現，如X衍射法測定一級結構；分離相應蛋白質的mRNA，由mRNA的一級結構排出蛋白質的一級結構等。這些大膽的設想必將有助于蛋白質的一級結構測定，使人們掌握更多的工具和方法去探索生命的奧秘。
